Contrat doctoral
Étude du rôle de Myd88 dans la transformation du lymphocyte B post-centre germinatif et conséquences sur le micro-environnement immun
✍️ 𝗗𝗲𝘁𝗮𝗶𝗹𝘀 𝗲𝘁 𝗰𝗮𝗻𝗱𝗶𝗱𝗮𝘁𝘂𝗿𝗲 :
Mots clés
Oncogenèse, NF-kappa B, Lymphome B
Profil et compétences recherchées
Le candidat doit posséder des compétences et une expertise dans le domaine la biologie cellulaire, biologie moléculaire et cytométrie de flux. Des connaissances en oncologie, hématologie et immunologie sont également souhaitées.
Savoir-être : Travail en équipe, autonomie et sens de l’organisation, capacité d’adaptation, curiosité.
Niveau de français requis: Intermédiaire supérieur: Vous pouvez utiliser la langue de manière efficace et vous exprimer précisément.
Niveau d’anglais requis: Intermédiaire: Vous pouvez parler la langue de manière compréhensible, cohérente et avec assurance sur des sujets de la vie courante qui vous sont familiers.
Résumé du projet de thèse
Les lymphomes B sont des cancers du lymphocyte B (LB) classés en deux catégories principales : le lymphome de Hodgkin ou les lymphomes non Hodgkiniens B (LNH B). NF-Kappa B (NF-KB) est le système transcriptionnel le plus souvent cité dans la littérature sur les LNH B qu’ils soient indolents (évolution lente) ou agressifs (évolution rapide). L’activation constitutive de NF-KB, notamment via le BCR et/ou le microenvironnement, est le 2ème facteur de danger majeur de la transformation du LB (Pasqualucci and Klein, 2022).
La Maladie de Waldenström (MW) est un lymphome lymphoplasmocytaire (LPL) incurable et indolent des personnes âgées qui représente moins de 5% des lymphomes à cellules B. Ce lymphome à évolution lente est caractérisé par l’expansion d’un clone lymphoplasmocytaire de localisation médullaire avec sécrétion d’une immunoglobuline monoclonale de type M (IgM). Une des particularités de la MW est que les cellules clonales présentent une différenciation continue entre le petit lymphocyte mature et le plasmocyte mature (PC) (Gayet et al., 2021). La découverte de la mutation L265P au niveau du gène MYD88 dans plus de 90% des patients (une protéine adaptatrice impliquée dans la signalisation du Toll Like Receptor et activant la voie NF-KB) a démontré que la MW est une véritable entité génétiquement distincte des autres lymphomes indolents avec sécrétion d’IgM (Buske and Leblond, 2013; Gachard et al., 2013; Treon et al., 2012). Malgré l’arrivée de nouvelles thérapies, la MW reste toujours incurable. Il est donc important de développer de nouvelles approches dans ce domaine. Au laboratoire CRIBL, nous avons créé un modèle animal porteur de la mutation murine de Myd88L252P (orthologue de la mutation humaine MYD88 L265P) au niveau du locus Rosa26 dont l’expression est inductible grâce au système Cre/Lox (Ouk et al., 2021). Une expression induite dans toutes les cellules B (Myd88L252P/Cd19_Cre) nous a permis de démontrer le pouvoir transformant de MYD88 dans la transformation B. Cependant, avec ce modèle nous ne reproduisons pas l’origine cellulaire du clone tumoral car l’expression de Myd88L252P est forcée dans toutes les cellules B dès les stades précoces. Or, dans le cadre de la MW, il est admis que l’équivalent non tumoral est le LB mémoire post-centre germinatif (Gachard et al., 2013; Parrens et al., 2008).
Le premier objectif de cette thèse sera donc de mieux comprendre l’origine cellulaire du clone tumoral dans la MW en exprimant la mutation Myd88 uniquement dans les PC (Myd88L252P/ChainJ_Cre-ERT2). Un point fort de ce modèle est que l’induction se fera dans un petit pool de plasmocytes à un temps donné en présence de tamoxifène.
De plus, Myd88 L252P coopérant préférentiellement avec BTK (une kinase de la voie du récepteur de la cellule B (BCR), nous étudierons également la coopération entre les voies NF-KB et du BCR en réalisant dans ce nouveau modèle inductible des immunisations aiguës et chroniques. La relation entre MYD88 L252P et PIM2 sera également étudiée i) in vitro avec la différenciation de LB humains MW et ii) in vivo dans nos modèles Myd88L252P/Cd19_Cre et ChainJ_Cre ; PIM2 étant une kinase importante pour la survie des PC et retrouvée surexprimée dans notre modèle Myd88L252P/Cd19_Cre.
De plus, les mécanismes d’échappement à la réponse immune dans les LNH B mettent en exergue le rôle de NF-KB (Lemasson et al., 2021). Nous avons récemment mis en évidence, en présence de Myd88L252P, plusieurs mécanismes d’échappement à la réponse immune. Un autre objectif de la thèse sera de poursuivre ses travaux en testant ex vivo puis in vivo des combinaisons thérapeutiques ciblant à la fois les cellules B tumorales et le micro-environnement immun.
Thématiques Domaine
L’équipe 2MB2C (« Molecular Mechanisms of B Cell and Cancerogenesis ») étudie les mécanismes oncogéniques et des conséquences physiopathologiques associées à la lymphomagenèse B. le projet de thèse s’inscrit dans l’axe de recherche Modélisation de la lymphomagenèse B.
Les domaines concernés par le projet de thèse sont l’immunologie et l’oncologie.
Objectif et contexte
Afin de mieux comprendre l’origine cellulaire du clone tumoral dans la MW, le premier objectif sera de comparer l’effet de l’expression de la mutation Myd88 à différents stades du développement B (au niveau de la moelle et au stade plasmocytaire) ainsi que sur la réponse immune anti-tumorale. Le deuxième objectif sera d’identifier d’éventuels partenaires de Myd88 connus pour engendrer des résistances aux thérapies actuelles, notamment la voie du BCR. Enfin, ces différents modèles seront utilisés en pré-clinique pour tester de nouvelles thérapies ou combinaisons thérapeutiques.
Différentes molécules, seules ou en combinaison, sont actuellement proposées pour le traitement de la MW sans qu’il y ait de « vainqueur clair ». Malgré les thérapies actuelles, la MW demeure incurable. Il est donc important de développer de nouvelles approches dans ce domaine. Avec quelques autres groupes, nous avons créé des modèles animaux porteurs d’une mutation Myd88 afin de mimer la MW (Ouk et al., 2021; Schmidt et al., 2020; Sewastianik et al., 2019; Knittel et al., 2016). Notre stratégie, différente de celle des autres groupes, a consisté à insérer la mutation Myd88 L252P (orthologue murin de la mutation humaine) dans le locus Rosa26. L’expression de la mutation est conditionnée à l’expression d’une CRE recombinase grâce au système Cre/LoxP (modèle inductible). Ainsi dans notre modèle, nous respectons la signalisation MYD88 endogène de la souris et pouvons forçer l’expression du mutant spatialement et temporellement.
Méthode
1/ Expression de la mutation Myd88 L252P dans les plasmocytes
Ce nouveau modèle original permettra d’induire la mutation Myd88L252P dans quelques plasmocytes et aura pour objectif de reproduire l’origine cellulaire du clone tumoral. Pour cela les souris Myd88L252P seront croisées avec les souris ChainJ_Cre. Dans ce modèle, le gène de la recombinase CRE, fusionnée à une forme mutante du récepteur à l’oestrogène (CRE-ERT2) est inséré dans le locus IgJ, de manière à être entièrement sous le contrôle des éléments régulateurs endogènes du gène IgJ. En présence de Tamoxifène la recombinase CRE-ERT2 est transloquée au noyau et agit sur ses cibles.
2/ Coopération Myd88 et voie du BCR et PIM2
Etant donné que la contrepartie normale dans la MW est un LB mémoire post-centre germinatif, cela suppose que les cellules B sont passées par un état d’activation dans le centre germinatif. Nous savons aussi que les cellules B MW sont hypermutées. De plus il est connu que la mutation Myd88 L265P coopère plus facilement avec la kinase BTK de la voie du BCR. C’est pourquoi dans ce deuxième volet, nous interrogerons l’effet d’immunisation sur l’émergence clonal lorsque la mutation est exprimée dans les plasmocytes. Pour cela des lots de souris seront immunisés avec des globules rouges de moutons (SRBC) un fois (immunisation aiguë) ou tous les mois pendant 6 mois (immunisation chronique). Les mêmes analyses citées plus haut seront effectuées sur ces différentes cohortes.
Egalement dans cette partie, nous évaluerons la relation entre Myd88 et la kinase PIM2 dont le rôle est indispensable pour la survie des plasmocytes. De façon intéressante, nous retouvons une surexpression de cette kinase dans le modèle Myd88L252P/Cd19_Cre. Des analyses in vitro et in vivo seront effectuées pour étudier le rôle de PIM2 dans un contexte Myd88 muté.
3/ Etude pré-clinique ciblant le micro-environnement immun dans la MW
Une première approche sera effectuée ex vivo et permettra de voir l’effet de plusieurs combinaisons sur la prolifération cellulaire et l’expression de marqueurs d’activation et d’épuisement au niveau des lymphocytes T.
Résultats attendus
En exprimant la mutation Myd88L252P à différents stades du développement B, nous comprendrons mieux l’origine cellulaire du clone MW et le rôle de la surveillance immunitaire dans l’émergence clonale des tumeurs MW. Nous évaluerons aussi la coopération de Myd88 avec d’autres oncogènes connus pour engendrer des résistances. Nous pourrons proposer de nouvelles cibles ou combinaisons thérapeutiques pour le traitement de la MW. En effet, différentes molécules, seules ou en combinaison, sont actuellement proposées pour le traitement de la MW sans qu’il y ait de « vainqueur clair » (Leblond et al., 2016). Avec ce projet, nous souhaitons mieux comprendre ce cancer afin d’améliorer la prise en charge des patients.
Précision sur l’encadrement
Nathalie Faumont et Christelle Vincent-Fabert co-encadreront la thèse : direction et suivi hebdomadaires des expérimentations.
Conditions scientifiques matérielles (conditions de sécurité spécifiques) et financières du projet de recherches
Le présent projet s’appuie sur les infrastructures de notre unité de service d’appui à la recherche BISCEm (Biologie Intégrative Santé Chimie Environnement) US 42 INSERM / UAR2015 CNRS de notre institut de recherche OmegaHealth_Une approche intégrée au bénéfice de la Santé, qui réunit l’ensemble des unités de recherche actives dans les domaines de la Biologie, Santé, Chimie et Environnement à Limoges.
BISCEm (https://www.unilim.fr/biscem/) est une plateforme technologique de l’Université de Limoges issue de l’association de 5 plateaux techniques et services communs universitaires (SCA, CIm, SCRABL, GenoLIM et HistoLIM), 1 000 m2 de locaux dédiés à la plateforme et situés au Centre de Biologie et de Recherche en Santé CBRS (lieu de résidence de l’unité CRIBL).
Objectifs de valorisation des travaux de recherche du doctorant : diffusion, publication et confidentialité, droit à la propriété intellectuelle,…
En plus de la valorisation des résultats au travers de publications, le doctorant sera formé aux métiers de la recherche avec l’opportunité de diffuser ses travaux de recherche et d’accroitre ses contacts avec les acteurs de la recherche au travers de congrès régionaux, nationaux et également internationaux. Notamment, les congrès organisés par le Cancéropôle Grand Sud-Ouest, l’OncoSphère Nouvelle-Aquitaine, la Société Française d’Hématologie, l’European Hematology Association et l’American Society of Hematology. L’équipe encadrante est membre de ces organisations scientifiques spécialisées en hématologie pour la plupart.
L’accompagnement à l’insertion professionnelle des doctorants est un enjeu majeur de l’Université de Limoges qui organise par exemple annuellement depuis 2014, une journée sur le devenir des docteurs qui permet, d’une part, d’élargir les perspectives professionnelles des docteurs et, d’autre part, de stimuler les interactions entre acteurs impliqués dans l’insertion professionnelle, la valorisation, l’innovation et jeunes chercheurs.